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准确的,高通量的方法来衡量特定于站点的泛素丰

技术#20180317

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IBAQ-Ub workflow
类别
研究人员
陈越,博士
助理教授,生物化学,分子生物学和生物物理学
外部链接 (cbs.umn.edu)
通过管理
肯尼斯·卡兰贾
技术授权官 612-624-4531
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出版物
泛素化位点特异性化学计量学分析化学定量蛋白质组学方法
应用化学国际版, 2019年01月08; 58(2):537-541
测量位点特异性泛素丰一种快速,灵敏的方法:泛素化(ibaq-UB)的同位素平衡的量化

一种新的方法来测量蛋白的泛素化

泛素化的赖氨酸是在真核细胞的重要的翻译后修饰,并参与细胞过程,包括DNA损伤和修复,亚细胞定位和蛋白质降解的大量。蛋白质的泛素化的改变都与许多严重的疾病,包括癌症,神经退行性疾病和免疫性疾病。然而,分析赖氨酸泛素化的可靠,特异,快速的方法不存在。在澳门新葡新京开发出一种新技术采用的化学蛋白质组学方法在使用同位素标记acetylglycylglycyl-NHS标记蛋白特异性标记泛素化赖氨酸残基。此标记区分了从泛素化赖氨酸残基感兴趣的蛋白质未修改的赖氨酸残基,并允许使用定量质谱法。数据显示,该方法中,被称为泛素化的同位素平衡的定量(ibaq-UB)是可靠的,具体的和必须被发展成高通量方法来测量泛素丰度的潜力。

提高对现有方法的局限性

相比于用于评估蛋白泛素化的通用方法,ibaq-UB不需要使用位点特异性抗体的或额外的富集步骤,节省了时间和金钱。此外,这种技术不依赖于体外的其它方法(即AQUA)所需的同位素标记的标准合成,并且因此可以使在蛋白质泛素化的生理相关变化全球无针对性的发现。有进一步的发展,ibaq-UB可能有临床应用和使用用于患者组织的生物标志物研究。

发展阶段

概念验证。使用合成的蛋白标准品的方法验证。

Key Benefits & Differentiators

  • 准确地评估蛋白质的泛素化: ibaq-UB方法可靠地测量泛素化化学计量作为对标准验证。而不需要目的蛋白的富集,节省时间和资源。
  • 节省时间和资源: 方法不需要靶蛋白的富集,使用位点特异性的抗体或标记的标准体外合成。
  • 灵活的各种情况: 可以用纯化的蛋白或复合物的细胞裂解物一起使用。适合于优化用于高通量的工作流程。

应用

  • 测量和位点特异性蛋白泛素化的比较
  • 泛素化的临床生物标志物的发现和评估
  • 高通量的泛素化测量


准备许可

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